酵母双杂交原理及流程 酵母双杂交原理

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1、酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。

2、前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用， 启动它所调节的基因的转录。

3、扩展资料：酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用， 具有高度敏感性。

4、主要是由于：采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。

5、2、信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。

6、3、杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强， 后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。

7、4、通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。

8、同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。

9、在研究蛋白质的结构功能特点、作用方式过程中，有时还要通过突变、加抑制剂等手段破坏蛋白质间的相互作用。

10、针对实际工作中的这种需要,Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统（reverse two-hybrid system）。

11、这项技术的关键是报道基因URA3的引入。

12、URA3基因在这里起到了反选择的作用，它编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶。

13、参考资料来源：百度百科——酵母双杂交。

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