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1、1.冻存菌种1:100接种于3mlLB液体培养基37℃摇床过夜震荡培养 2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基37℃摇床培养1.5-2h 3.菌种冰上放置10min4℃、4000rpm下离心10min收集菌体 4.弃上清用事先冰浴0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞冰浴30min 5.收集菌体条件同上 6.弃上清冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液 7.分装保存(40%甘油与感受态细胞1:1混合使甘油终浓度20%)。
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