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1、琼脂糖凝胶的配制⑴琼脂糖凝胶的制备:称取0.3g琼脂糖,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。
2、将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,加入溴化乙锭,充分混匀。
3、⑵胶板的制备:①取有机玻璃内槽,洗净、晾干;②将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上,安好挡板,放好梳子。
4、吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘,任其凝固,在距离底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。
5、如果梳子距离玻璃板再近,则拔出梳子时孔底将有破裂的危险,破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏。
6、③将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中,使胶液缓慢地展开,直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
7、凝胶的厚度在3~5mm之间,检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。
8、 ④室温下静置30min左右,待凝固完全后,轻轻拔出梳子,在胶板上即形成相互隔开的上样孔。
9、制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5~1×TAE(Tris-乙酸) 或TBE(Tris-硼酸)工作液的电泳槽中使用,没过胶面1mm以上。
10、(注:溴化乙锭是一种强烈的诱变剂并有中度毒性。
11、使用含有该染料的溶液时必须戴手套。
12、使用完后应该进行净化处理。
13、通常用水配制成10mg/ml的贮存液在室温下避光储存,使用终浓度为0.5μg/ml。
14、)。
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