transwell细胞迁移实验药物加上室还是下室 transwell细胞迁移实验

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1、Transwell法的步骤：先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。

2、如新的小室省略此步。

3、下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。

4、这是将细胞消化下来，调浓度。

5、拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。

6、小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。

7、放入细胞培养箱培养4-6小室。

8、拿出小室甩掉里边的培养基。

9、小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。

10、将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。

11、移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。

12、细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法） 1．膜预处理将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。

13、在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。

14、实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。

15、2. 处理细胞将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。

16、小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。

17、上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。

18、3. 固定小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝上放置，彻底晾干。

19、然后再甲醇里粗面朝上固定5min，彻底晾干。

20、4. 染色粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。

21、这个方法比transwell方便。

22、与boyden chemper法类似。

相信通过transwell细胞迁移实验这篇文章能帮到你，在和好朋友分享的时候，也欢迎感兴趣小伙伴们一起来探讨。